Материал и методы исследования
Вышеперечисленные препараты фабричного изготовления применял в качестве подкормки пчёлам в смеси с сахарным сиропом для повышения иммунитета организма медоносных пчёл, сопротивляемости к заболеваниям, увеличения сохранности и продуктивности пчелосемей.
Для определения повышения иммунитета пчёл под действием дикорастущих растений была использована методика простой диффузии в агаре (Гузеева Л.Н., 1982), которая основана на способности секретов желез кишечника пчелы растворять взвешенный в агаре ацетоновый порошок (М. lysodeikticus).
Методика определения активности антибиотических веществ подглоточной, грудной, средней и задней желез заключалась в следующем: пчёл омертвлял. Головку пчелы отделял, а пищевод отсекал раскаленной над пламенем спиртовки препаровальной иглой. При этом содержимое зобика надёжно герметизируется.
Головки в количестве 10 штук растирал в ступке со стерильным кварцевым песком. К полученной смеси добавлял 1 мл стерильного физиологического раствора, экстракт центрифугировал при 800 об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость использовал в реакции.
В стерильные чашки Петри наливал по 25 мл мясопептонного агара наносил 1 мл взвеси микробной культуры на физиологическом растворе, содержащей 2 млрд. микробных клеток. Использовал 2-суточную культуру бактерий М. lysodeikticus. Посредством покачивания чашки, суспензию равномерно распределял по поверхности среды с последующим удалением избытка жидкости пипеткой. После 30 минутного подсушивания при комнатной температуре, в агаре пробойником пробивал 5 лунок диаметром 6 мм. Лунки заполнял экстрактами исследуемых тканей. Каждый экстракт испытывал на антибиотическую активность. Контролем служил стерильный физиологический раствор.
Результаты реакции учитывал по задержке микробного роста вокруг лунок после 48 – часового инкубирования в термостате при 320С.
В опытной чашке измерял диаметр зон задержки роста микрококка, образующихся вокруг лунок с исследуемым материалом, в контрольной чашке учитывал рост микрококка и зоны задержки роста вокруг лунок с физиологическим раствором. Полученные величины складывал и выводил средние арифметические отдельно для каждого препарата.
Согласно рекомендациям «Унификация методов определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам», утверждённых Минздравом СССР 13 марта 1975 г., считали, что задержка роста микроба до 10 мм свидетельствует о низкой чувствительности его к препарату, слабой бактерицидности вещества; зону задержки микробного роста более 10 мм расценивали как наличие чувствительности микроорганизма, как выраженную бактерицидность исследуемого вещества.
Полную задержку роста вокруг лунки с препаратом рассматривал как бактерицидное действие (как антибиотическую активность секретов желез кишечника).
Пчёлы обладают сопротивляемостью, которая обеспечивается в первую очередь антибиотическими веществами желез кишечника. Железы кишечника – антибиотические вещества. Эти вещества являются обязательными компонентами свежесобранного нектара или сахарного сиропа, что предохраняет незрелый жидкий мёд от брожения. Зрелый мёд не содержит антибиотических веществ и сохраняется за счёт высокой концентрации сахаров и кислот.
Подглоточной железы лишены личинки пчёл и трутни, а у маток она недоразвита. Антибиотические вещества подглоточной и грудной желез попадают в корм личинок старшего возраста, а в свежесобранном нектаре в период взятка количество их значительно увеличивается, поскольку первые порции антибиотических веществ вносят пчёлы-сборщики. Эти же вещества в меньшей мере с секретом подглоточной железы и в большей мере с секретом грудной – поступают вместе с кормом в медовый зобик, а затем в средний и задний отделы кишечника рабочей пчелы, где участвуют в регулировании кишечной микрофлоры. По мере продвижения пищевых масс по кишечнику активность антибиотических веществ снижается.
Средняя кишка является своеобразной фабрикой ферментов, участвующих в пищеварительных процессах. Из медового зобика вместе с пищей в среднюю кишку попадают некоторое количество инвертазы, амилазы, каталазы, протеазы и антибиотических веществ.