Принципиальная схема получения ферментных препаратов

Схема очистки фермента от балластных веществ сводится к освобождению его от нерастворимых веществ, сопутствующих растворимых веществ и других ферментов. Процессы получения очищенных препаратов из поверхностных и глубинных культур несколько различны. Из поверхностных культур труднее получить высокоочищенные препараты из-за большого количества балластных веществ. Из глубинных культур получить очищенные препараты несколько легче, но при этом приходится вести выделение из разбавленных растворов, если выделение ферментов проводится из жидкой части культуры. Выделение осложняется, если фермент внутриклеточный, и тогда необходимо разрушать клетки микроорганизмов.

Принципиальную схему выделения и очистки ферментов из глубинных и поверхностных культур микроорганизмов можно представить в виде следующей схемы.

Из схемы ясно, что экстракт из поверхностной культуры или фильтрат культуральной жидкости является исходным материалом для получения препаратов ферментов различной степени очистки. На первом этапе выделения отходом процесса является нерастворимая часть культуры – биошрот, содержащий нерастворимые включения среды и биомассу продуцента.

Таблица 1

Стадии очистки

Объём, мл

Общее количество белка, мг

Глюкоамилаэная активность

Амилолитическая активность

Трансглюкоэидазиая активность*

общая, ед.

удельная, ед./мг белка

выход,%

степень очистки

общая, ел.

выход,%

Исходная культуральная жидкость

1 200

13 600

28 500

2,1

100,0

1,0

9 500

100

Глюкоза,изомальтоза,

Отделение биомассы, концентрирование, отделение

560

11 100

25 600

2,3

90,0

1,1

8 500

89,00

То же

Осаждение ацетоном, растворение в воде

350

2 040

19 800

9,7

69,5

4,6

1 050

11,30

»

Ультрафильтрация

55

1 610

18 200

11,3

64,0

5,4

860

9,10

»

Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе

555

298

15 000

50,4

52,5

24,5

30,0

0,35

Нет

Ультрафильтрация

16

250

13 450

54,0

47,2

25,7

27,5

0,29

»

Гельфильтрование через акрилекс П-100

100

140

11 400

76,5

40,35

36,5

22,8

0,24

»

Обессоливание, лиофилизация

0,1**

92

7 150

77,0

25,0

37,0

14,3

0,15

»

*

**

Характеризуется хроматографически по наличию изосахаров.

Выряжено в г.

Перейти на страницу:
1 2